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由于產(chǎn)品有效成分不同,其含量檢測(cè)的也會(huì)采取不同方法,有簿層色譜(TLC)、高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜法(GC)、滴定法、重量法、分光光度法(包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、原子吸收分光光度法等)、質(zhì)譜法等。
一:分光光度法
紫外-可見光分光光度計(jì)
1、原理:是通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。
2、分類:
(1)對(duì)照品比較法
按各品種項(xiàng)下的方法,分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液,對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的100%±10%,所用溶劑也應(yīng)完全一致,在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度后,按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度∶
CX=(AX/AR)CR
式中 CX為供試品溶液的濃度;
AX為供試品溶液的吸光度;
CR為對(duì)照品溶液的濃度;
AR為對(duì)照品溶液的吸光度。
(2)吸收系數(shù)法
按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液,在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí),吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100,并注意儀器的校正和檢定。
(3)比色法
供試品溶液加入適量顯色劑后測(cè)定吸光度以測(cè)定其含量的方法為比色法。
用比色法測(cè)定時(shí),應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照品溶液,用溶劑補(bǔ)充至同一體積,顯色后,以相應(yīng)試劑為空白,在各品種規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定各份溶液的吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的濃度,并求出其含量。
也可取對(duì)照品溶液與供試品溶液同時(shí)操作,顯色后,以相應(yīng)的試劑為空白,在各品種規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定對(duì)照品和供試品溶液的吸光度,按上述(1)法計(jì)算供試品溶液的濃度。
除另有規(guī)定外,比色法所用空白系指用同體積溶劑代替對(duì)照品或供試品溶液,然后依次加入等量的相應(yīng)試劑,并用同樣方法處理制得。
二:液相色譜法
高效液相色譜儀
1、原理:儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測(cè)器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來,然后根據(jù)圖譜中目標(biāo)物質(zhì)信號(hào)的大小來對(duì)產(chǎn)品濃度進(jìn)行定性和定量分析。目前應(yīng)用*多的是高效液相色譜法。
2、分類:
(1)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)法
取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分,按依次增加或減少的已知階段量,各自分別加入各單體所規(guī)定的定量?jī)?nèi)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中,調(diào)制標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取此標(biāo)準(zhǔn)液的一定量注入色譜柱,根據(jù)色譜圖取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分的峰面積和峰高和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積和峰高的比例為縱坐標(biāo),取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分量和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量之比,或標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分量為橫坐標(biāo),制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后按單體中所規(guī)定的方法調(diào)制試樣液。在調(diào)制試樣液時(shí),預(yù)先加入與調(diào)制標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)等量的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。然后按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的同樣條件下得出的色譜,求出被測(cè)成分的峰面積或峰高和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰積或峰高之比,再按標(biāo)準(zhǔn)曲線求出被測(cè)成分的含量。
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線法:
取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分按依次增加或減少階段法,各自調(diào)制成標(biāo)準(zhǔn)液,注入一定量后,按色譜圖取標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分的峰面積或峰高為縱坐標(biāo),而以標(biāo)準(zhǔn)被測(cè)成分的含量為橫坐標(biāo),制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后按單體中所規(guī)定的方法制備試樣液。取試樣液按制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)相同的條件作出色譜,求出被測(cè)成分的峰面積和峰高,再按標(biāo)準(zhǔn)曲線求出被測(cè)成分的含量。
(3)對(duì)照品比較法:
按規(guī)定方法,分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液,對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的100%±10%,所用溶劑也應(yīng)完全一致,在規(guī)定的色譜條件下分別做出色譜,得出被測(cè)成分的峰面積和峰高,按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度,即可算出樣品成分含量
CX=(AX/AR)CR
式中 CX為供試品溶液的濃度;
AX為供試品溶液的峰面積或峰高;
CR為對(duì)照品溶液的濃度;
AR為對(duì)照品溶液的峰面積或峰高。
(4)峰面積百分率法
以色譜中所得各種成分的峰面積的總和為100,按各成分的峰面積總和之比,求出各成分的組成比率。
三:氣相色譜法:
1、原理:氣液色譜法是一種在有機(jī)化學(xué)中對(duì)易于揮發(fā)而不發(fā)生分解的化合物進(jìn)行分離與分析的色譜技術(shù)。氣相色譜的典型用途包括測(cè)試某一特定化合物的純度與對(duì)混合物中的各組分進(jìn)行分離(同時(shí)還可以測(cè)定各組分的相對(duì)含量)在某些情況下,氣相色譜還可能對(duì)化合物的表征有所幫助。
2、分類:氣相色譜分析分類和液相色譜基本相同。
此外還有滴定法、重量法、質(zhì)譜分析法、液質(zhì)聯(lián)用、氣質(zhì)聯(lián)用等各種分析方法,在此就不一一闡述。